Описанная ниже схема слияния (рис. 28.3) — одна из тех, которые успешно используются во многих лабораториях. Применение полиэтиленгликоля в качестве сливающего агента широко используется благодаря его эффективности, простоте приготовления и воспроизводимости результатов. Другие схемыслияния могут отличаться от описанной по различным параметрам, однако существует одно общее правило: лучше использовать какую-то одну из них, а не сочетание нескольких.

1. Суспензии клеток селезенки или лимфатического узла, выделенных из иммунизированной мыши, получают стандартным способом в «ледяном» забу-ференном фосфатами физиологическом растворе.
2. Клетки миеломы выращивают в среде RPMI-1640, содержащей инакти-вированную нагреванием сыворотку эмбриона коровы {10—20%), пенициллин (100 ед/мл), стрептомицин (100 мкг/мл), амфотерицин (0,25 мкг/мл) и 2-меркап-тоэтанол (5х10-5М). Такая среда называется полной средой. Она же используется и для добавления ГАТ-ингредиентов, Клетки миеломы, находящиеся в логарифмической фазе роста, собирают и отмывают однократно безсывороточной средой RPMI-1640.
3. Равные количества миеломных и лимфоидных клеток смешивают и дваж-ды отмывают путем центрифугирования в бессывороточной среде RPMI-1640 при 1000 g и 37°С.
4. К осадку клеток, разбитому с помощью легкого потряхивания центри-фужной пробирки, добавляют 1 мл предварительно нагретого 40%-ного раст-вора ПЭГ. Клетки инкубируют около 1 мин в присутствии ПЭГ, который затем медленно разбавляют безсывороточной средой RPMI, добавляемой по каплям (5 мл в течение первых пяти минут, и затем более быстро еще 15—20 мл). После этого клетки центрифугируют при 1000g и осторожно переносят с помощью пи-петки во флакон, содержащий предварительно нагретую среду ГАТ
5. На этой стадии к слившимся клеткам могут быть добавлены сингенные фидерные (питающие) клетки. Их получают, инъецируя 5—8 мл полной среды в брюшную полость неиммунизированной мыши. При обратном изъятии большей части этого объема отбирается такое количество перитонеальных макрофагов, которое достаточно для получения примерно 120 мл среды, содержащей фидерные клетки. Другими источниками фидерных клеток служат нормальная селезенка и тимус.
6. Плотность полученной смеси доводят до (1—5)-105 клеток/мл, после чего по 1 мл суспензии осторожно разливают в лунки 24-луночного планшета.