
Благодаря своей высокой специфичности и отсутствию загрязнения другими сывороточными компонентами моноклональные антитела оказались особенно удобными для иммунофлуоресцентного анализа. Поскольку антитела к мембран-ным компонентам или другим клеточным органеллам, отбираемые на основе описанных выше тестов, не всегда могут быть пригодны для исследований мето-дом иммунофлуоресценции, то в тех случаях, когда они нужны для этого, ре-комендуется проводить скрининг также с помощью иммунофлуоресцентных тестов. Конечно, скрининг большого количества супернатантов может занять довольно много времени, однако существует несколько способов, позволяющих сделать эту процедуру менее утомительной. Клетки-мишени могут быть зафик-сированы с помощью поли-Ь-лизина или глутаральдегида на микроячейках предметных стекол (Headley Essex Multispot Slide, Shandon Southern Instru-¦ ments). Такого же эффекта можно добиться, если клетки сорбировать или вы-ращивать на стерильных стеклах в виде монослоя. После соответствующей фик-сации (если это необходимо) к клеткам добавляют небольшое количество надо-садочной жидкости из каждой содержащей гибридому лунки, и затем клетки, связавшие антитела, выявляют с помощью антимышиных антител, меченных флуоресцентным красителем. Такие микроячейки можно сделать самим, если на предметное стекло наклеить 10—12 полос двусторонней прозрачной липкой ленты параллельно друг другу с интервалами в 2—3 мм и затем накрыть их покровным стеклом размером 22x64 мм. В результате получится большое количество микроячеек, в которые, используя капиллярные эффекты, можно внести окрашенные в суспензии клетки. Края микроячеек затем закрывают с помощью лака для ногтей. Просмотр индивидуальных клеточных суспензий может осуществляться путем обычной клеточной микроскопии.
В более сложном анализе для скрининга супернатантов гибридом использу-ется проточный цитофлуориметр [45]. Наличие различного оборудования для работы с микропробами, позволяющего быстро инъецировать многочисленные образцы окрашенных клеток в кювету цитофлуориметра, позволяет быстро анализировать большие количества индивидуальных супернатантов. Эту про-цедуру можно сделать еще более удобной, если окрашивание клеток-мишеней индивидуальными супернатантами осуществлять в лунках 96-луночного планшета, а стадию отмывки проводить путем одновременного центрифугирования всех 96 образцов в специальных центрифужных адаптерах для 96-луночных планшетов. Такой метод анализа, безусловно, будет полезным в тех случаях, когда результаты окрашивания специфическими антителами можно прямо сопоставить с размером клеток или сравнить с результатами окрашивания, про-водимого с помощью каких-либо других моноклональных антител, меченных другим флуоресцентным красителем, так же как и с другими параметрами, измеряемыми с помощью проточного цитофлуориметра.