В последнее время большую популярность приобрел метод скрининга, в основе которого лежит использование антител, коньюгированных с ферментом. Согласно данному методу, антиген в разных формах, например в виде раствора, связывается лунками 96-луночного планшета (при этом существенное значение имеют рН и концентрация солей). Лунки тех же самых или аналогичных план-шетов, будучи предварительно обработанными глутаральдегидом или поли-L-лизином, могут связать и целые клетки, которые в этом случае будут выступать в качестве иммобилизованных клеток-мишеней. В лунки, покрытые антигенами-мишенями, ^добавляют супернатанты из содержащих гибридомы лунок и (после необходимой инкубации) связанные с ферментом антитела, специфичные по отношению к мышиным иммуноглобулинам. Затем после еще одной инкубации и отмывки добавляют субстрат фермента и лунки, содержащие мышиные гибри-домные антитела, связавшиеся с исследуемым антигеном, обнаруживают по появлению яркоокрашенного продукта реакции.

Использование иммуноферментных реагентов имеет определенные пре-имущества. Конъюгаты легко приготовить, а при соблюдении соответствующих условий их можно хранить в течение длительного времени (2—3 года), так что отпадает необходимость в частом приготовлении новых препаратов, как в случае 12б1-меченных антител. Продукт реакции субстрата с ферментом, свидетель-ствующий о наличии в данной лунке гибридомных антител, может быть обнаружен визуально и без использования дорогостоящего оборудования, необходимого для измерения радиоактивности. Иногда оказывается, что определенный антиген, взятый в качестве мишени, обладает собственной ферментативной активностью. Например, в цитоплазме В-клеток некоторых человеческих линий содержится большое количество щелочной фосфатазы. Если в качестве вторых -антител использовать антитела, конъюгированные с щелочной фосфатазой, то будет наблюдаться неприемлемо высокий уровень фона, обусловленный собственной ферментативной активностью В-клеток. В таких случаях можно посоветовать перейти на другой фермент, например {i-галактозидазу или пероксидазу хрена [30]. Методы, подобные иммуноферментному, могут быть приспособлены и для количественного анализа. В продаже имеется несколько высококачественных приборов, с помощью которых можно быстро и точно измерить оптическую плотность в лунках, содержащих субстрат. Использование таких приборов позволяет непосредственно определять содержание антител в супернатантах и сыворотках. Другое очевидное преимущество данного метода по сравнению с радиоиммунным анализом — это возможность избежать опасности загрязнения окружающей среды, возникающей при использовании реагентов, меченных изотопами. Более детальное описание различных иммуноферментных методов и их использования при скрининге гибридом приведено в книге Энгвалла и Песке [30].