Вход на сайт
Логин
Пароль
 
Навигация по сайту
Опрос на сайте

Да
Нет


Календарь
«    Июнь 2008    »
ПнВтСрЧтПтСбВс
 
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
 

Популярные статьи
  • Анализ данных графическое и численное представления.
  • Анализ по Скэтчарду.
  • Антигенные детерминанты белковой и полипептидной природы.
  • Антигены группы крови.
  • Антигены углеводной природы.
  • Взаимодействие антител с моновалентным лигандом.
  • Взаимодействие с поливалентными лигандами.
  • Возможные изменения структуры антитела, возникающие при связывании антигена.
  • Гаптены.
  • Гемагглютинация.
  • Двухфазные системы.
  • Декстрансвязывающие миеломные белки.
  • Диффузия двух компонентов в двух направлениях (метод Ухтерлони).
  • Диффузия двух компонентов в одном направлении.
  • Диффузия одного компонента в двух направлениях (метод Манчини).
  • Диффузия одного компонента в одном направлении.
  • Другие методы.
  • Иммунодиффузия.
  • Иммуноферментный анализ (ИФА).
  • Иммунохимические свойства О-антигенов сальмонелл.
  • Иммуноэлектрофорез.
  • Истинная аффинность.
  • Количественная преципитация.
  • Конформационное равновесие у антигенных детерминант белковой и пептидной природы.
  • Конформация или последовательность.
  • Методы разделения в растворе.
  • Методы разделения на твердой фазе.
  • Неравновесный РИА.
  • Определение концентраций антител.
  • Полиспецифичность.
  • Поправки к В, F и Т.
  • Радиошшунологический анализ (РИА) и родственные ему методы.
  • Разделение связанного и свободного антигенов.
  • Ракетный электрофорез.
  • Специфичность и перекрестные реакции.
  • Торможение гемагглютинации.
  • Взаимодействия идиотип — антиидиотип.
  • Выбор миеломы.
  • Выращивание гибридом в культуре.
  • Гетерогибридомы.
  • Гибридомы человек-человек.
  • Гипоксантин, аминоптерин и тимидин (ГАТ). Обмен и процедуры отбора.
  • Диагностика и терапия.
  • Иммуноферментный анализ (ELISA).
  • Иммунофлуоресцентный анализ.
  • Моноклональныс антитела и лимфогемопоэтические клетки.
  • Общие вопросы, касающиеся получения.
  • Опухолевые антигены.
  • Получение моноклональных антител.
  • Причины неудач при получении гибридом.
  • Радиоиммунный анализ.
  • Разнообразие В-клеток.
  • Распознавание эпитопов моноклональными.
  • Скрининг.
  • Слияние клеток разных, непрерывно растущих опухолевых линий.
  • Способы иммунизации.
  • Схемы слияния клеток.
  • Т-клеточные гибридомы.
  • Активация Тгзт в ответ на антигены бактерий,.
  • Варианты замедленной гиперчувствительности и клетки, участвующие в этой реакции.

  • Наши партнеры

    Рекламный блок
    Ракетный электрофорез. Кухни мира
    Ракетный электрофорез.В ракетном электрофорезе, как и в описанном выше методе Манчини, на стеклянную поверхность наносят слой агарозного геля, содержащего специ-фические антитела, после чего в небольшие вырезанные в геле лунки добавляют антиген. Под действием электрического поля заряженные молекулы мигрируют в гель, тогда как молекулы антител, положение которых примерно соответствует их изоэлектрическим точкам, остаются неподвижными. В отличие от описанных выше методов диффузии в ракетном электрофорезе перемещение молекул антигена обусловливается не градиентом концентрации, а движущей силой, создаваемой электрическим полем. Поскольку при этом из стартовой лунки выходит весь образец, в опыте можно использовать более низкие концентрации антигена. При прохождении через гель молекулы антигена взаимодействуют с находящимися в нем специфическими антителами. Первоначально концентрация антигена столь велика, что между антигеном и антителами образуются лишь растворимые иммунные комплексы (антиген2—антитело и антиген--антитело). В результате движение связанных молекул антигена по сравнению с избыточными свободными молекулами оказывается замедленным. Когда свободный антиген проникает в зону, где его концентрация эквивалентна концентрации антител, начинает формироваться иммунный преципитат. Экспериментально было обнаружено, что граница области преципитации антиген—антитело по форме напоминает ракету (отсюда и название метода), ориентированную в направлении электрического поля и прямо пропорциональную по высоте начальной концентрации антигена [121].

    Хотя интуитивно можно предположить, что площадь ракеты должна быть пропорциональна концентрации антигена, фактически же в центре ракеты к концу электрофореза обнаруживается лишь незначительное количество антигена, Для выяснения зависимости размеров ракеты от концентрации антигена необходимо рассмотреть условия, в которых происходит перемещение границы преципитации. По мере того как фронт распространения антигена движется вперед, количество молекул антигена в нем постепенно уменьшается. Это продолжается до тех пор, пока концентрация антигена на границе не становится эквивалентной концентрации антител в геле, после чего начинается преципитация. Зона, следующая за фронтом антигена, содержит комплексы молекул антигена с антителами (антиген2—антитело и антиген—антитело). В этой зоне нет свободных молекул антигена, которые могли бы участвовать в дальнейшем продвижении переднего фронта. В то же время по мере того как комплексы антиген2—антитело оказываются внутри переднего фронта, они растворяют об-разовавшийся преципитат и перемещают границу преципитации вперед. Когда комплексы антиген2—антитело кончаются, остаются лишь комплексы анти-ген—антитело, которые не способны растворять преципитат, поскольку могут лишь пристраиваться к уже сформированной решетке. Начиная с этого момента высота ракеты уже больше не будет меняться. Площадь ракеты (и высота у ракет одинаковой ширины) должна быть пропорциональна отношению количества антигена (почти целиком находящегося теперь в составе экви-молярных комплексов антиген-антитело) к концентрации антител в геле (т.е. к количеству антител, приходящемуся на 1 см2). При электрофорезе положение границы преципитации не меняется, хотя по мере того, как комплексы антиген-антитело пристраиваются к решетке, интенсивность полосы увеличивается. Соотношение между высотой ракеты и отношением количества антигена к концентрации антител при этом также остается постоянным.

    Существенное преимущество ракетного электрофореза заключается в том, что он позволяет получать количественные характеристики и является более чувствительным, чем метод Манчини. Поскольку высота ракеты пропорцио-нальна концентрации антигена, количество антигена в неизвестном образце можно определить путем сравнения высоты экспериментально полученной ракеты с высотами нескольких стандартных ракет. При любой концентрации антигена высоту ракеты, а следовательно, и чувствительность метода можно увеличить путем уменьшения заданной концентрации антител в геле. В этом случае антиген сможет пройти большее расстояние, пока его концентрация не уменьшится до уровня эквивалентности. Как показывает практика, нижний предел для обнаружения большинства антигенов с помощью метода ракетного электрофореза составляет от 1 до 10 нг.
     
    Уважаемый посетитель вы вошли на сайт как незарегистрированный пользователь. Мы рекомендуем вам зарегистрироваться либо войти на сайт под своим именем.
    Добавление комментария
    Главная страница | Регистрация | Добавить новость | Новое на сайте | Статистика Copyright © 2008. Секреты иммунологии All Rights Reserved