Радиоиммунологический анализ (РИА) впервые описали Ялоу и Берсон в 1960 г. [37]. Ныне РИА — наиболее чувствительный и весьма широко исполь-зуемый метод определения концентрации различных биологических молекул. Основные принципы, необходимые для понимания и применения этого метода, уже были изложены в первых разделах данной главы. В настоящем разделе мы обсудим важнейшие идеи и методологические подходы, используемые в РИА. Для более детального изучения РИА читатель отсылается к книге Чарда [36] и обзорам Родбарда [37] и Ялоу [38].
Основная идея РИА заключается в том, что связывание высокорадиоак-тивномеченного антигена, взятого в бесконечно малой концентрации, со специфическими антителами, обладающими по отношению к нему значительной аффинностью и присутствующий в малой концентрации, оказывается очень чувствительным к конкуренции со стороны немеченого антигена и весьма специфичным к антигену. Вследствие этого концентрацию антигена в неизвестном образце можно определять по его способности конкурировать с меченым антигеном за связывание с антителами. Метод может быть использован для измерения низких концентраций молекул, даже в тех случаях, когда в исследуемой биологической жидкости имеются многочисленные примеси. Для этого необходимо приготовить радиоактивно меченный антиген и антитела, обладающие по отношению к нему высокой аффинностью, научиться отличать связанный меченый антиген от свободного, найти оптимальные для получения максимальной чувствительности концентрации антител и меченого антигена и, зная концентрации конкурирующего немеченого антигена, построить стандартную кривую, с помощью которой затем определить концентрацию антигена в неизвестных образцах. Кроме того, необходимо выбрать наиболее удобный способ графического (или численного) представления данных. Здесь мы не будем излагать методы приготовления антител и меченых антигенов, а обсудим другие этапы, а также наиболее сложные вопросы, касающиеся использования РИА.