Обсуждавшаяся до сих пор аффинность Касс — это как раз та величина, которая была названа истинной аффинностью, т.е. аффинностью каждого взятого в отдельности антигенсвязывающего центра антитела. Введение дан-ной величины в наши уравнения допустимо безотносительно к валентности антител, если при этом используется концентрация антигенсвязывающих центров [S], а не концентрация молекул антител [А], способных . иметь более одного участка связывания. Даже в отсутствие кооперативное™ между анти-генсвязывающими центрами возникает статистический эффект, приводящий к тому, что функциональная аффинность отличается от истинной, если антитела поливалентны и используется концентрация молекул антител, а не связывающих участков. Возникновение этого различия может быть лучше всего проиллюстрировано на примере бивалентных антител, таких как IgG. Мы предполагаем, что оба участка связывания в молекуле IgG эквивалентны и не оказывают влияния друг на друга. Лиганды, как и везде в данном разделе, предполагаются моновалентными. Связывание лиганда при этом происходит в два этапа.

Если истинная аффинность обоих эквивалентных участков равна К, то когда самая первая молекула только собирается связаться на этапе 1, К1 будет в действительности в два раза больше Кг, поскольку концентрация доступных при этом участков [S] будет в два раза больше концентрации антител. Однако если один участок связан, то обратная реакция этапа 1, может идти только в одном участке — именно в том, который занят. Наоборот, на втором этапе для прямой реакции имеется лишь один оставшийся свободным участок, тогда как в случае обратной реакции AL2 -*- AL + L для возврата в AL-coc-тояние диссоциация может идти в любом из связывающих центров. Занятый второй участок совсем не обязательно должен освободиться первым, а поскольку центры связывания идентичны, ни о каком различии между ними при диссоциации говорить не приходится. В результате для этапа 2 эффективная концентрация связывающих центров для обратной реакции окажется в два раза выше, чем для прямой реакции, а аффинность К% для второй реакции будет составлять лишь половину истинной аффинности К.
Данный статистический эффект, как легко видеть, можно экстраполировать на антитела, имеющие п центров связывания [27].
Для получения значений функциональной аффинности промежуточных этапов можно использовать два способа [уравнения (7, 27)], каждый из которых дает.

Если лиганд (L) является моновалентным и присутствует в столь низкой концентрации, что реально может связаться лишь с одним антигенсвязываю-щим центром молекулы антитела, то важное значение приобретает функциональная (выражающаяся через молярную концентрацию), а не истинная аффинность. Тогда для IgG или IgM (имеющих 2 и 10 центров связывания на молекулу соответственно) кажущаяся аффинность теоретически будет в 2 или 10 раз выше истинной. В большинстве случаев, однако, удобнее пользоваться концентрацией участков связывания и истинной аффинностью. С по-мощью описанных выше методов анализа, включающих в себя построение гра-фика зависимости B/F от F (График Скэтчарда) или же зависимости В или г/с от г, легко определяется значение истинной аффинности. Именно эта величина дает нам информацию о природе взаимодействия антитело-лиганд. В случае поливалентных лигандов эффективное сродство, функциональная аффинность, учитывающая многоцентровое связывание между поливалентными молекулами антител и поливалентными молекулами лиганда, может оказаться значительно более высокой, чем истинная аффинность, описывающая взаимодействие каждого из центров связывания. Данный вопрос подробно обсуждается в следующей части.