В данном методе Ц20], как и в предыдущем, антитела предварительно вводят в гель, однако диффузия антигена идет не в одном, а в двух направлениях (рис. 23.20,i>). Раствор, содержащий антиген а, вносят в небольшую лунку, вырезанную в геле, сформированном в чашке Петри. Таких лунок делается несколько, и в каждую из них антиген добавляют после очередного разбавления. Внесенный антиген начинает диффундировать, вследствие чего вокруг каждой лунки возникает градиент его концентрации. Когда на некотором расстоянии от лунки концентрация антигена достигнет точки эквивалентности, вокруг лунки появится кольцо преципитации соответствующего радиуса. Чем выше была первоначальная концентрация антигена в лунке, тем на большее расстояние он продиффундирует до того, как сформируется кольцо, и тем шире будет это кольцо. Площадь кольца прямо пропорциональна начальной концентрации антигена. Данный метод представляет собой удобный количественный тест, широко используемый при определении класса иммуноглобулинов. С этой целью тестируемую сыворотку вносят в лунку, а антисыворотки против каждого класса иммуноглобулинов добавляют в агар. Чувствительность можно увеличить путем понижения концентрации антисыворотки в геле. При этом размеры кольца увеличиваются, поскольку антигену для образования кольца необходимо будет иметь меньшую концентрацию. Однако антисыворотку нельзя разбавлять слишком сильно, поскольку тогда преципитация вообще не будет иметь места.