Согласно этому методу [119], в стеклянной чашке Петри приготовляют гель на основе чистой агарозы. Затем в нем вырезают три или больше лунок, как показано на рис. 23.21. Антигены а и б добавляют в верхние лунки, а анти-сыворотку, содержащую антитела против обоих антигенов, — в нижнюю. При этом, как и в случае одномерной диффузии, каждая пара антиген-антитело будет формировать свою полосу преципитации независимо от наличия других таких пар в системе. Как видно на рис. 23.21, Л, эта полоса должна выступатьна одинаковую длину с обеих сторон от прямой, соединяющей лунки с антигеном и антителами. Если разные антигены находятся в различных лунках (рис. 23.21,5), то отдельные преципитирующие системы не будут взаимодействовать между собой и поэтому линии преципитации будут пересекаться. Однако если в обе лунки добавлен один и тот же антиген (рис. 23.21,Б), то каждая линия преципитации окажется барьером для дальнейшей диффузии образующих ее антигена и антител, что вызовет укорочение полосы преципитации со стороны второй лунки. Кроме того, диффузия антигена из этой лунки будет сдвигать зону избытка антигена, что приведет к искривлению обеих линий преципитации и объединению их друг с другом в одну изогнутую линию. Полное слияниелинии преципитации без шпор (в противоположность тому, что показано на рис. 23.21, Д и .Г) называется линией идентичности. Ее появление свидетельствует о том, что антиген, находящийся в каждой из лунок, связывается со всеми антителами, способными взаимодействовать с антигеном, из другой лунки.

Значительную аналитическую мощность этого метода можно проиллюст-рировать с помощью рисунка 23.21,Г. В левую лунку добавлены антигены а и б, в правую — антиген б, а антисыворотка содержит антитела как к я, так и к б. Если антитела к а в избытке, то взаимное расположение линий преципитации окажется таким, как показано на рис. 23.21, Г: со стороны левой лунки будут видны две линии, а со стороны правой — одна. Две линии, слившиеся в одну, будут соответствовать антигену б, а третья линия — антигену д, По длине пути, который прошли антигены, можно судить об их относительных концентрациях, если предположить, что коэффициенты диффузии обоих антигенов сравнимы, а антитела против каждого из них присутствуют в равных количествах. Наконец, поскольку линия преципитации, соответствующая антигену а, не искривляется и не укорачивается вблизи правой лунки, это означает, что образец в данной лунке не загрязнен антигеном а и, кроме того, между двумя антигенами нет иммунологического перекреста.

Тщательный анализ результатов подобных экспериментов дает возможность обнаружить дополнительные детали, касающиеся наличия частичного перекреста между антигенами или антителами. В опытах, схемы которых приведены на рис. 23.21, Д и Е, в левую лунку добавляют антиген, имеющий две детерминанты а и б, в правую — антиген, имеющий одну детерминанту б, а в нижнюю — антитела против обеих детерминант. Если при этом антитела анти-а находятся в избытке, то взаимное расположение линий преципитации будет таким, как показано на рис. 23.21, Е. В результате взаимодействия антител к а с (аб)-частицами появится левая линия преципитации. Однако она будет служить барьером также и для диффузии антител к б, что приведет к укорочению правой линии преципитации. В то же время линия преципитации антигена б и антител к нему не оказывает влияния на диффузию антител к а, поэтому укорочения левой линии наблюдаться не будет. В результате возникнет шпора, изображенная на рис. 23.21,is. Если же в избытке находятся антитела к б, то расположение линий преципитации будет соответствовать рис. 23.21, Д. В этом случае и (аб)~, и б-антигены связываются с одними а теми же антителами; поэтому будут иметь место искривление и слияние линий преципитации. Одновременно будет наблюдаться шпора, появляющаяся при взаимодействии антител к а с (аб)-антигеном. Если между антителами наблюдается частичный иммунологический перекрест, а антисыворотка представляет собой смесь антител, направленных против обоих антигенов, то тот компонент антисыворотки, который ответственен за образование доминирующей линии преципитации, определяет, каким будет взаимное расположение линий преципитации.

Необходимо еще раз подчеркнуть, что иммунологический перекрест, об-наруживаемый с помощью метода Ухтерлони, соответствует определенному ранее перекресту второго типа. Описанный метод оказывается непригодным для измерения различий в аффинности, необходимых для количественного описания иммунологического перекреста первого типа. Отметим также, что чув-ствительность метода можно увеличить, если использовать радиоактивпоме-ченный антиген, а преципитат детектировать с помощью радиоавтографии.