Гемагглютинация представляет собой один из наиболее чувствительных методов, с помощью которых можно получать полуколичественные характе-ристики взаимодействия антител с антигеном. Метод этот включает в себя аг-глютинацию с помощью антител эритроцитов, предварительно нагруженных антигеном [122]. Поскольку антиген в данном случае имеет не эндогенное про-исхождение, подобная реакция называется пассивной гемагглютпинацией. На-тивные эритроциты несут на себе отрицательный заряд, что приводит к воз-никновению между ними электростатических сил отталкивания, препятствующих агглютинации. Однако после обработки танином (0,02 мг/мл в течение 10 мин при 37°С) клетки начинают легко слипаться друг с другом.

Необработанные эритроциты довольно просто покрыть легко адсорбиру-ющимися антигенами полисахаридной природы. Что касается белковых ан-тигенов, то адсорбция некоторых из них после обработки клеток танином идет хорошо, а клетки в результате становятся весьма чувствительными к антителам. В то же время связывание других белковых антигенов с эритроцитами оказывается довольно нестабильным. Именно в этом заключается причина ограниченного использования данного метода для определенных антигенов. Оче-
видно, что небольшие агрегаты и частично денатурированные белки будут ад-сорбироваться предпочтительно [122]. Чистота антигена на этапе адсорбции тоже оказывается чрезвычайно важной, поскольку возможные примеси могут конкурировать за связывающие участки на поверхности клеток. После обработки танином и адсорбции антигена эритроциты хранят в 1%-ном растворесыворотки для предотвращения спонтанной агрегации. Если обработка танином не была проведена, то адсорбцию некоторых антигенов белковой природы можно облегчить путем обработки клеток хлоридом хрома, действие которого, по-видимому, заключается в нейтрализации отрицательных зарядов на клеточной поверхности. Наконец, с помощью бивалентных сшивающих агентов, таких как бисдиазобензидин или глутаровый альдегид, или с помощью карбо-диимида проводят ковалентное присоединение антигенов к поверхности клеток. Проверку специфичности антител осуществляют путем последовательного разбавления антисыворотки в U-образных лунках многоячеечного планшета (рис. 23.23). Затем в каждую лунку добавляют по 0,1 мл 1 %-ной суспензии эритроцитов, нагруженных антигеном. После перемешивания происходит осаждениеклеток в течение двух часов. В присутствии специфических антител агглюти-нированные клетки оседают на круглое дно лунки, покрывая его ровным слоем. Неагглютинированные эритроциты скользят вниз по стенкам лунки и формируют на самом дне плотный осадок в виде точки. Титр образца определяют по самому большому разведению, при котором агглютинация еще имеет место. Агглютинированные клетки образуют непрочную сеть, которую можно еще раз ресуспендировать после осаждения. При этом, вновь осев на дно, эти клетки, как и в первый раз, покроют его ровным слоем. При использовании гипериммунных сывороток с высокой концентрацией антител можно наблюдать торможение агглютинации, называемое прозонным эффектом. Было высказано два предположения о природе этого явления. Одно из них зключается в том, что данный эффект аналогичен торможению образования осадка при количественной преципитации, когда в условиях большого избытка антител каждая клетка покрывается своими молекулами антител, и вероятность сшивки двух клеток одной молекулой сильно уменьшается. Во втором случае предполагается существование некоторых видов малоэффективных антител, которые связываются с участками на молекулах антигенов, но не вызывают при этом агрегации клеток [7]. Прозонный эффект обычно наблюдается при значительно меньших разведениях сыворотки, чем агглютинация. Чтобы гарантировать специфичность узнавания антигена, антисыворотку необходимо перед экспериментом истощить на ненагруженных эритроцитах и, кроме того, каждый опыт должен включать в себя контроль на связывание антигена с ненагружен-ными клетками.

Преимущество описанного метода заключается в значительно более высокой по сравнению с иммунопреципитацией чувствительностью, поскольку в данном случае единичное происходящее на молекулярном уровне событие воспринимается как агглютинация целого эритроцита. Специфичность по от-ношению к антигену при гемагглютинации такая же, как и при иммунопреци-питации. Если, например, ядерные (незрелые) эритроциты нагружены одним антигеном, а безъядерные (зрелые) другим, то в результате гемагглютинации смеси клеток с помощью антисыворотки, содержащей антитела против обоих антигенов, будут образовываться два типа агрегатов, в каждом из которых присутствуют эритроциты лишь одного типа. При использовании данного метода следует, однако, иметь в виду, что чувствительность реакции агглютинации существенно зависит от степени покрытия клеток антигеном, а этот параметр сильно варьирует в зависимости от антигена. Кроме того, как оказалось, IgM вызывают агглютинацию значительно более эффективно, чем IgG (титры препаратов, содержащих антитела, различаются иногда в 750 раз), что может приводить к неправильной интерпретации результатов титрования. На-конец, титр может варьировать в два раза просто в силу субъективности вывода о том, какое разведение считать последним.