Заметим, что при таком, на первый взгляд, очень простом преобразовании было сделано одно весьма существенное предположение. Величина [SL] в уравнении (3) обозначает концентрацию насыщенных участков связывания антител, так что ([S]t — [SL])= свободные [S]. В уравнении (8) эта же величина обозначается буквой В. Если лиганд ведет себя как моновалентный, то такая замена законна, поскольку каждой связанной молекуле лиганда соответствует насыщенный участок связывания на антителе. Но если лиганд поливалентен
и может связываться более чем с одним участком антитела, то уравнение (8) остается справедливым только при условии избытка лиганда, когда вероятность связывания данной молекулы лиганда более чем с одним участком на антителе оказывается весьма малой. В данной части мы будем рассматривать лишь моновалентные лиганды, однако в других случаях при проведении анализа Скэтчарда это замечание необходимо иметь в виду.

Из уравнения (8) видно, что график зависимости величины B/F от В должен представлять собой прямую (если все антитела имеют одинаковое сродство) с наклоном Касс, отсекающую на оси абсцисс отрезок, численно равный концентрации связывающих участков антител (рис. 23.3). Это так называемый график Скэтчарда. Используется и другой вариант графика, нормированный на концентрацию антител, который особенно удобен в тех случаях, когда данные были получены при различных общих концентрациях антител [А](, а не при постоянной [A]t. Однако для построения этого варианта графика требуется независимое измерение общей концентрации антител, не связанное с измеренном длины отрезка, отсекаемого на оси абсцисс. Разделив тогда уравнение (8) на общую концентрацию молекул антител (безотносительно к тому, сколько участков связывания приходится на одну молекулу), получим где г — количество насыщенных участков, приходящееся на одну молекулу антитела, п — общее количество участков, приходящихся на одну молекулу антитела, ас — концентрация свободного лиганда (с == F), т.е. г — B/[A]t, п — [S](/[A](, где [A]f — общая концентрация антител в молях. В данном варианте графика Скэтчарда (зависимость г/с от г) наклон прямой также равняет ся —Касс, а на оси абсцисс отсекается отрезок, равный п. В результате можно определить количество участков связывания, приходящееся на одну молекулу. Конечно, если [S]t определяется через длину отрезка, отсекаемого на оси абсцисс графиком зависимости от В [см. уравнение (8)], то тогда, разделив [S]t на измеренную любым независимым способом концентрацию антител, можно также определить и количество участков связывания, приходящееся на одну молекулу. Поэтому единственное преимущество предварительной нормировки всех экспериментальных точек и построения r/c-варианта графика проявляется в том случае, когда данные бывают получены при различных концентрациях антител. Если же концентрация антител неизвестна, но остается постоянной, то B/F-форма графика более удобна, так как показывает собственно концентрацию антител (участков связывания лиганда). Поскольку теперь мы знаем значение п для каждого класса антител (2 для IgG и сывороточных IgA, 10 для IgM), то во многих случаях концентрацию антител легко можно перевести в концентрацию участков связывания лиганда и обратно.

сли данные уже получены, то существует много способов расчета аф-финности, из которых мы рассмотрим здесь два. По-видимому, наиболее широко используется способ, описанный Скэтчардом.